Calogênese em Cissus sicyoides L. a partir de segmentos foliares visando à produção de metabólitos in vitro / Calluses from Cissus sicyoides L. leaves

Os metabólitos secundários são essencialmente produzidos e extraídos a partir de plantas cultivadas no campo sobre a influência de variações sazonais. A utilização de técnicas biotecnológicas apresenta-se como um recurso alternativo para a produção de fármacos. Dentre essas técnicas, destaca-se a cultura de tecidos através da calogênese, uma vez que o crescimento de calos é desejável para induzir variação somaclonal e estudos fisiológicos, principalmente quando se deseja relacionar a presença de metabólitos secundários com o crescimento celular. Assim, o objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de calogênese de Cissus sicyoides L., a partir de segmentos foliares visando à produção de metabólitos in vitro. Para o estabelecimento in vitro, foram utilizados como explantes, segmentos foliares retirados de planta adulta cultivada em campo. Após desinfestação, o material foi inoculado em meio MT + 1,0 mg L-1 ANA e mantido em câmara de crescimento tipo BOD, com temperatura e luminosidade controladas. Após 30 dias foram avaliados a porcentagem de explantes sobreviventes e de contaminação. Para o cultivo utilizou-se o meio MT + 1,0 mg L-1 ANA, variando-se as concentrações de BAP em 2,0; 4,0; 6,0 e 12,0 mg L-1. No cultivo avaliou-se o número de calos compactos e friáveis. Para o primeiro e segundo subcultivo o material foi introduzido em meio MT + 1,0 mg L-1 ANA variando-se as mesmas concentrações de BAP, sendo avaliados o número de calos friáveis formados e o tamanho da massa de calos. Foi obtido ainda o número de repetições formadas no decorrer dos subcultivos, peso da matéria fresca (g) e seca (g). Em seguida, foram realizados os testes fitoquímicos para identificação de alguns constituintes. Concluiu-se que o tempo e a concentração de hipoclorito de sódio utilizado, mostraram-se pouco eficientes para a desinfestação. Para a calogênese de Cissus sicyoides L. a partir de segmento foliar faz-se necessário a adição de 6,0 mg L-1 de BAP ao meio de cultivo ...

Secondary metabolites are essentially produced and extracted from plants grown in the field under influence of seasonal variations. The use of biotechnological techniques is an alternative resource for drug production. Among these techniques, tissue culture through callus genesis is highlighted, since callus growth is desirable to induce somaclonal variation and physiological studies, especially when the presence of secondary metabolites can be related to cell growth. The aim of this work was to establish a protocol for Cissus sicyoides L. callus genesis from leaf segments in order to produce metabolites in vitro. Thus, leaf segments removed from adult plants grown in the field were used as explants. After disinfestation, the material was inoculated into MT medium + 1.0 mg L-1 NAA and kept in a BOD chamber, with controlled temperature and luminosity. After 30 days, the percentage of surviving explants and the percentage of contamination were evaluated. For culture, MT medium + 1.0 mg L-1 NAA was used, varying BAP concentrations: 2.0, 4.0, 6.0 and 12.0 mg L-1. In the cultivation, the number of compact and friable calluses was counted. For the first and second subculture, the material was introduced into MT medium + 1.0 mg L-1 NAA, varying the same BAP concentrations; the number of friable calluses formed and the size of callus mass were described. The number of replicates formed during subcultures, and fresh and dry matter (g) were also obtained. Then, phytochemical tests were done in order to identify some compounds. The adopted time and concentration of sodium hypochlorite proved to be inefficient for disinfestation. For Cissus sicyoides L. callus genesis from leaf segments, the addition of 6.0 mg L-1 BAP to the culture medium is needed. Cardiotonic heterosides were detected in Cissus sicyoides L. calluses.

Multiplicação in vitro e aclimatação de Vernonia condensata Baker / In vitro multiplication and acclimation of Vernonia condensata Baker

A espécie medicinal Vernonia condensata, vulgarmente conhecida por alumã, pertencente à família Asteraceae, possui propriedades analgésicas e de proteção gástrica. A crescente utilização dessa planta no Nordeste, pelas propriedades terapêuticas, justifica a necessidade de medidas que minimizem o impacto de sua exploração nas reservas naturais. O objetivo desse trabalho foi multiplicar in vitro plantas de alumã sob diferentes concentrações de BAP e aclimatá-las. Gemas axilares foram desinfestadas em solução de álcool etílico 70 por cento, durante 2 minutos e em solução de hipoclorito de sódio (2 por cento de cloro ativo) na concentração de 3:1, durante 15 minutos, seguido de três lavagens em água destilada estéril. Os tratamentos para multiplicação consistiram em doses de BAP (0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 e 5,0 mg L-1) em meio MS semi-sólido. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com 5 repetições, contendo 10 gemas por repetição. Após 30 dias de cultivo observou-se maior taxa de explantes responsivos, 84 por cento na concentração de 1,0 mg L-1 de BAP, com produção de 4,0 brotos/explante. Nos tratamentos 3,0; 4,0 e 5,0 mg L-1 ocorreu hiperhidricidade nas folhas. As microplantas de alumã provenientes da metodologia utilizada neste trabalho alcançaram 100 por cento de sobrevivência na aclimatação.

The medicinal species Vernonia condensata, commonly known as "alumã", belongs to the family Asteraceae and has analgesic and gastric protective properties. The increasing use of this plant in the Northeast of Brazil due to its therapeutic properties justifies the need of measures to minimize the impact of its exploitation in natural reserves. The aim of this study was to multiply, in vitro, "alumã" plants under different BAP levels, acclimating them. Axillary buds were sterilized in 70 percent (v/v) alcohol solution for 2 minutes and in 75 percent sodium hypochlorite solution (2 percent active chlorine) at 3:1 concentration for 15 minutes, followed by three washings in sterile distilled water. Multiplication treatments consisted of different BAP levels (0.0; 1.0; 2.0; 3.0; 4.0 and 5.0 mg L-1) in semi-solid MS medium. The experimental design was completely randomized, with 5 replicates and 10 buds per replicate. After 30 days of cultivation, the highest rate of responsive explants was obtained: 84 percent at 1.0 mg L-1 BAP, producing 4.0 sprouts/explant. In the treatments 3.0, 4.0 and 5.0 mg L-1, there were vitrified leaves. The "alumã" microplants used in this study had 100 percent survival in acclimation.

The use of the PMI/mannose selection system to recover transgenic sweet orange plants (Citrus sinensis L. Osbeck).

A new method for obtaining transgenic sweet orange plants was developed in which positive selection (Positech) based on the Escherichia coli phosphomannose-isomerase (PMI) gene as the selectable marker gene and mannose as the selective agent was used. Epicotyl segments from in vitro-germinated plants of Valencia, Hamlin, Natal and Pera sweet oranges were inoculated with Agrobacterium tumefaciens EHA101-pNOV2116 and subsequently selected on medium supplemented with different concentrations of mannose or with a combination of mannose and sucrose as a carbon source. Genetic transformation was confirmed by PCR and Southern blot. The transgene expression was evaluated using a chlorophenol red assay and isoenzymes. The transformation efficiency rate ranged from 3% to 23.8%, depending on cultivar. This system provides an efficient manner for selecting transgenic sweet orange plants without using antibiotics or herbicides.